ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ର ବ୍ୟବହାର ଏବଂ ସତର୍କତା |
1) ଏକ ଉପଯୁକ୍ତ ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ବାଛନ୍ତୁ |ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ ଯେ UF br ାଞ୍ଚାଗୁଡ଼ିକ ବିଭିନ୍ନ ରାସାୟନିକ ପଦାର୍ଥ ପ୍ରତି ସହନଶୀଳତା ସ୍ତରରେ ଭିନ୍ନ |ସାଧାରଣତ ,, 10 kDa ମଲିକୁଲାର ଓଜନ କଟ୍ ଅଫ୍ ସହିତ ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ଏକ ମଲିକୁଲାର୍ ଓଜନ କଟ୍ ଅଫ୍ ସହିତ ଚୟନ କରାଯାଇପାରିବ ଯାହା ଆଗ୍ରହର ପ୍ରୋଟିନର ମଲିକୁଲାର ଓଜନର 1/3 ରୁ ଅଧିକ ହେବା ଉଚିତ ନୁହେଁ, ଯେପରିକି 35 kDa |ଯଦି ଆଗ୍ରହର ପ୍ରୋଟିନର ମଲିକୁଲାର୍ ଓଜନ ପ୍ରାୟ 10 kd ଥାଏ, ତେବେ 3 KD ର ମଲିକୁଲାର୍ ଓଜନ କଟ୍ ଅଫ୍ ସହିତ ଏକ ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |
()) ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍, ନୂତନ ଭାବରେ କିଣାଯାଇଥିବା, ଶୁଖିଲା, ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ଅଲ୍ଟ୍ରାପ୍ୟୁର୍ ପାଣି ମିଶା ଯାଇଥାଏ ଏବଂ ଜଳ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍, ବରଫ ସ୍ନାନ କିମ୍ବା ରେଫ୍ରିଜରେଟର ଦେଇ କିଛି ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଥଣ୍ଡା ହୋଇଯାଏ |ତାପରେ ପାଣି poured ାଳି ଦିଆଯାଏ, ଅର୍ଥାତ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ ତରଳ, ଏବଂ କେତେ ଯୋଗ କରାଯାଏ, ଯାହା ଟ୍ୟୁବ୍ ଉପରର ଧଳା ଧାଡିଠାରୁ ଅଧିକ ନୁହେଁ |ଅପରେସନ୍ ହାଲୁକା, ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ଯୋଗ କରିବା ପୂର୍ବରୁ ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ବରଫରେ ଥଣ୍ଡା ହେବା ଆବଶ୍ୟକ |
3) ଉଭୟ ଭର ଏବଂ ମାଧ୍ୟାକର୍ଷଣ କେନ୍ଦ୍ର ସନ୍ତୁଳନରେ ପହଞ୍ଚିବା |ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ ଯେ ଘୂର୍ଣ୍ଣନ ଗତି ଏବଂ ତ୍ୱରଣ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଦ୍ରୁତ ନୁହେଁ, ଅନ୍ୟଥା ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ କୁ ସିଧାସଳଖ କ୍ଷତି ପହଞ୍ଚାଏ |ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗୁଲ୍ ଅଲଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍ ଆରମ୍ଭ ହୋଇଥିଲା (ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ 4 ଡିଗ୍ରୀ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ) |ବିଭିନ୍ନ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ସର RPM g ରେ ରୂପାନ୍ତରିତ ହେବା ପରେ, ଏହା ଅଲଗା ଥିଲା |ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ର ତ୍ୱରଣ ସର୍ବନିମ୍ନ ସ୍ତରରେ ସଜାଡି ହୋଇ br ୁଲା ଉପରେ ଚାପ ହ୍ରାସ କଲା |ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ, ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଗନ୍ତବ୍ୟ ସ୍ଥଳରେ ପହଞ୍ଚିବା ପରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଛାଡିବାକୁ ନିଶ୍ଚିତ ହୁଅନ୍ତୁ, କିମ୍ବା ଯଦି ଆପଣଙ୍କର କିଛି ଅସୁବିଧା ଅଛି, ତେବେ ଆପଣ ଏହାକୁ ପ୍ରଥମ ଥର ପାଇଁ ପରିଚାଳନା କରିପାରିବେ ନାହିଁ |ମେମ୍ବ୍ରାନ୍ର ସ୍ପିଣ୍ଡଲ୍ ପ୍ରତି ଆଭିମୁଖ୍ୟ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁଯାୟୀ ସଜାଡି ଦିଆଗଲା (ଆଙ୍ଗୁଲାର୍ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ କେସ୍ ମେମ୍ବ୍ରାନରୁ ଅକ୍ଷ ପର୍ପେଣ୍ଡିକୁଲାର) |ବ୍ୟବହାରିକ ବ୍ୟବହାରରେ, ସାଧାରଣ ଘୂର୍ଣ୍ଣନ ଗତି ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀ ତୁଳନାରେ କମ୍ ଅଟେ, ଯାହାଫଳରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ର ଜୀବନ ବ extended ିପାରିବ |
3) ଉଭୟ ଭର ଏବଂ ମାଧ୍ୟାକର୍ଷଣ କେନ୍ଦ୍ର ସନ୍ତୁଳନରେ ପହଞ୍ଚିବା |ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ ଯେ ଘୂର୍ଣ୍ଣନ ଗତି ଏବଂ ତ୍ୱରଣ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଦ୍ରୁତ ନୁହେଁ, ଅନ୍ୟଥା ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ କୁ ସିଧାସଳଖ କ୍ଷତି ପହଞ୍ଚାଏ |ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗୁଲ୍ ଅଲଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍ ଆରମ୍ଭ ହୋଇଥିଲା (ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ 4 ଡିଗ୍ରୀ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ) |ବିଭିନ୍ନ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ସର RPM g ରେ ରୂପାନ୍ତରିତ ହେବା ପରେ, ଏହା ଅଲଗା ଥିଲା |ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ର ତ୍ୱରଣ ସର୍ବନିମ୍ନ ସ୍ତରରେ ସଜାଡି ହୋଇ br ୁଲା ଉପରେ ଚାପ ହ୍ରାସ କଲା |ଧ୍ୟାନ ଦିଅନ୍ତୁ, ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଗନ୍ତବ୍ୟ ସ୍ଥଳରେ ପହଞ୍ଚିବା ପରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଛାଡିବାକୁ ନିଶ୍ଚିତ ହୁଅନ୍ତୁ, କିମ୍ବା ଯଦି ଆପଣଙ୍କର କିଛି ଅସୁବିଧା ଅଛି, ତେବେ ଆପଣ ଏହାକୁ ପ୍ରଥମ ଥର ପାଇଁ ପରିଚାଳନା କରିପାରିବେ ନାହିଁ |ମେମ୍ବ୍ରାନ୍ର ସ୍ପିଣ୍ଡଲ୍ ପ୍ରତି ଆଭିମୁଖ୍ୟ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁଯାୟୀ ସଜାଡି ଦିଆଗଲା (ଆଙ୍ଗୁଲାର୍ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ କେସ୍ ମେମ୍ବ୍ରାନରୁ ଅକ୍ଷ ପର୍ପେଣ୍ଡିକୁଲାର) |ବ୍ୟବହାରିକ ବ୍ୟବହାରରେ, ସାଧାରଣ ଘୂର୍ଣ୍ଣନ ଗତି ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀ ତୁଳନାରେ କମ୍ ଅଟେ, ଯାହାଫଳରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ର ଜୀବନ ବ extended ିପାରିବ |
()) ଯେତେବେଳେ ଅବଶିଷ୍ଟ m ୦୦ ମି.ଲି.ଯଦି ଟ୍ୟୁବ୍ ଲିକ୍ ହୁଏ, ତେବେ ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍ ଆରମ୍ଭ କରିବା ପାଇଁ ଉପର ସ୍ତର ଏବଂ ଫ୍ଲୋଥ୍ରୁକୁ ଏକ ନୂତନ ଟ୍ୟୁବରେ pour ାଳନ୍ତୁ |ଟ୍ୟୁବ୍ ମିସ୍ ହୋଇଛି କି ନାହିଁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବାକୁ, ଫ୍ଲୋଥ୍ରୋ ପୂର୍ବରୁ 5mgml BSA ସହିତ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍, ପ୍ରୋଟିନ୍ ଗ୍ଲୁ, କିମ୍ବା ବ୍ରାଡଫୋର୍ଡ ଅଶୋଧିତ ଅନୁଧ୍ୟାନରେ ଚାଲିବା, ଏବଂ ଅବଶିଷ୍ଟ ଏକାଗ୍ର ପ୍ରୋଟିନ୍ ସମାଧାନ (ଯାହା ବରଫରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରେ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଗରମରୁ ରକ୍ଷା କରେ) ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଜାରି ରଖ | ସମସ୍ତ ଏକାଗ୍ରତା ଯୋଗ କରାଯାଇଛି |ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ସମୟରେ ସାବଧାନ ରୁହନ୍ତୁ ଯଦି ପ୍ରୋଟିନ୍ ବୃଷ୍ଟିପାତ ହୁଏ, ଯାହା ଟ୍ୟୁବ୍ ବନ୍ଦ ହୋଇଯାଏ |ଯଦି ବୃଷ୍ଟିପାତ ହୁଏ, ନିର୍ଣ୍ଣୟ କର ଯେ ବୃଷ୍ଟିପାତର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କାରଣ ହେଉଛି ଅତ୍ୟଧିକ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଏକାଗ୍ରତା କିମ୍ବା ଅନୁପଯୁକ୍ତ ବଫର୍;ପୂର୍ବଟି ଏକାଧିକ ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ର ଏକକାଳୀନ ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍ ଦ୍ solved ାରା ସମାଧାନ ହୋଇପାରିବ, ଏକାଗ୍ରତା ହ୍ରାସ ହେବ ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ ବିଭିନ୍ନ ବଫର୍ ସମାଧାନ ବିନିମୟ କରି ପ୍ରୋଟିନର କ ip ଣସି ବର୍ଷା ନହେବା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ସମାଧାନ ହୋଇପାରିବ |
()) ଯେତେବେଳେ ଅବଶିଷ୍ଟ m ୦୦ ମି.ଲି.ଯଦି ଟ୍ୟୁବ୍ ଲିକ୍ ହୁଏ, ତେବେ ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍ ଆରମ୍ଭ କରିବା ପାଇଁ ଉପର ସ୍ତର ଏବଂ ଫ୍ଲୋଥ୍ରୁକୁ ଏକ ନୂତନ ଟ୍ୟୁବରେ pour ାଳନ୍ତୁ |ଟ୍ୟୁବ୍ ମିସ୍ ହୋଇଛି କି ନାହିଁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବାକୁ, ଫ୍ଲୋଥ୍ରୋ ପୂର୍ବରୁ 5mgml BSA ସହିତ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗ୍, ପ୍ରୋଟିନ୍ ଗ୍ଲୁ, କିମ୍ବା ବ୍ରାଡଫୋର୍ଡ ଅଶୋଧିତ ଅନୁଧ୍ୟାନରେ ଚାଲିବା, ଏବଂ ଅବଶିଷ୍ଟ ଏକାଗ୍ର ପ୍ରୋଟିନ୍ ସମାଧାନ (ଯାହା ବରଫରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରେ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଗରମରୁ ରକ୍ଷା କରେ) ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଜାରି ରଖ | ସମସ୍ତ ଏକାଗ୍ରତା ଯୋଗ କରାଯାଇଛି |ସେଣ୍ଟ୍ରିଫୁଗେସନ୍ ସମୟରେ ସାବଧାନ ରୁହନ୍ତୁ ଯଦି ପ୍ରୋଟିନ୍ ବୃଷ୍ଟିପାତ ହୁଏ, ଯାହା ଟ୍ୟୁବ୍ ବନ୍ଦ ହୋଇଯାଏ |ଯଦି ବୃଷ୍ଟିପାତ ହୁଏ, ନିର୍ଣ୍ଣୟ କର ଯେ ବୃଷ୍ଟିପାତର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କାରଣ ହେଉଛି ଅତ୍ୟଧିକ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଏକାଗ୍ରତା କିମ୍ବା ଅନୁପଯୁକ୍ତ ବଫର୍;ପୂର୍ବଟି ଏକାଧିକ ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ର ଏକକାଳୀନ ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍ ଦ୍ solved ାରା ସମାଧାନ ହୋଇପାରିବ, ଏକାଗ୍ରତା ହ୍ରାସ ହେବ ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ ବିଭିନ୍ନ ବଫର୍ ସମାଧାନ ବିନିମୟ କରି ପ୍ରୋଟିନର କ ip ଣସି ବର୍ଷା ନହେବା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ସମାଧାନ ହୋଇପାରିବ |
(5) ପ୍ରୋଟିନକୁ ଏକାଗ୍ର କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରଥମ କିଛି ପଦକ୍ଷେପ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ଏବଂ ଯଦି ବଫର୍ ପରିବର୍ତ୍ତନ ହେବାକୁ ପଡେ, ତେବେ ଧୀରେ ଧୀରେ ନୂତନ ବଫର୍ (0.22um ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍) ସମୁଦାୟ ପ୍ରୋଟିନ୍ରେ ମିଶାନ୍ତୁ, ଏବଂ ତିନିଟି ପାଇଁ ପ୍ରାୟ 1ml ରେ ପୁନ reconc ଏକାଗ୍ର ହୁଅନ୍ତୁ | କ୍ରମାଗତ ଥର, ଇଚ୍ଛିତ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଏକାଗ୍ରତା ଉପରେ ନିର୍ଭର କରି ଅନ୍ତିମ ଏକାଗ୍ର ଚୂଡ଼ାନ୍ତ ଭଲ୍ୟୁମ୍ ସହିତ, ସାଧାରଣତ 500 500ul ରୁ ଅଧିକ ନୁହେଁ, କିନ୍ତୁ 200ul ମଧ୍ୟରେ ମଧ୍ୟ |ତିନୋଟି ଥର 1000 × କିମ୍ବା ଅଧିକ ହାସଲ କରନ୍ତୁ, ମୁଖ୍ୟତ as ଯେତିକି ବଫର୍ ପରିବର୍ତ୍ତନ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ଥର ଅତି କମରେ 10 × କିମ୍ବା ଅଧିକ ଭଲ୍ୟୁମ୍ ସମୃଦ୍ଧ ଦ୍ୱାରା ଗଣନା କରାଯାଏ |
(5) ପ୍ରୋଟିନକୁ ଏକାଗ୍ର କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରଥମ କିଛି ପଦକ୍ଷେପ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ଏବଂ ଯଦି ବଫର୍ ପରିବର୍ତ୍ତନ ହେବାକୁ ପଡେ, ତେବେ ଧୀରେ ଧୀରେ ନୂତନ ବଫର୍ (0.22um ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ଅଲ୍ଟ୍ରାଫିଲଟ୍ରେସନ୍) ସମୁଦାୟ ପ୍ରୋଟିନ୍ରେ ମିଶାନ୍ତୁ, ଏବଂ ତିନିଟି ପାଇଁ ପ୍ରାୟ 1ml ରେ ପୁନ reconc ଏକାଗ୍ର ହୁଅନ୍ତୁ | କ୍ରମାଗତ ଥର, ଇଚ୍ଛିତ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଏକାଗ୍ରତା ଉପରେ ନିର୍ଭର କରି ଅନ୍ତିମ ଏକାଗ୍ର ଚୂଡ଼ାନ୍ତ ଭଲ୍ୟୁମ୍ ସହିତ, ସାଧାରଣତ 500 500ul ରୁ ଅଧିକ ନୁହେଁ, କିନ୍ତୁ 200ul ମଧ୍ୟରେ ମଧ୍ୟ |ତିନୋଟି ଥର 1000 × କିମ୍ବା ଅଧିକ ହାସଲ କରନ୍ତୁ, ମୁଖ୍ୟତ as ଯେତିକି ବଫର୍ ପରିବର୍ତ୍ତନ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ଥର ଅତି କମରେ 10 × କିମ୍ବା ଅଧିକ ଭଲ୍ୟୁମ୍ ସମୃଦ୍ଧ ଦ୍ୱାରା ଗଣନା କରାଯାଏ |
ପୋଷ୍ଟ ସମୟ: ନଭେମ୍ବର -09-2022