PCR, ହେଉଛି ପଲିମେରେଜ୍ ଚେନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା, ଯାହା DNA ପଲିମେରେଜ୍ ର କାଟାଲାଇସିସ୍ ଅନ୍ତର୍ଗତ ସିଷ୍ଟମରେ dNTP, Mg2 +, ବିସ୍ତାର କାରକ ଏବଂ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ବର୍ଦ୍ଧିତ କାରକଗୁଡିକର ଯୋଗକୁ ସୂଚିତ କରେ, ପ୍ୟାରେଣ୍ଟ୍ DNA କୁ ଏକ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରାଇମର୍ ଭାବରେ ବିସ୍ତାରର ପ୍ରାରମ୍ଭ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରେ, ଡେନାଟ୍ରେସନ୍, ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍, ଏକ୍ସଟେନ୍ସନ୍ ଇତ୍ୟାଦିର ଷ୍ଟେପ୍ ମାଧ୍ୟମରେ, ଭିଟ୍ରୋରେ daughter ିଅ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ ଡିଏନ୍ଏକୁ ପ୍ୟାରେଣ୍ଟାଲ୍ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ DNA ସହିତ ସଂପୃକ୍ତ ପ୍ରକ୍ରିୟା ଭିଟ୍ରୋରେ ଯେକ target ଣସି ଲକ୍ଷ୍ୟ DNA କୁ ଶୀଘ୍ର ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଭାବରେ ବ ify ାଇପାରେ |
1. ହଟ୍ ଷ୍ଟାର୍ଟ PCR |
ପାରମ୍ପାରିକ PCR ରେ ବିସ୍ତାରର ଆରମ୍ଭ ସମୟ ହେଉଛି PCR ମେସିନ୍ କୁ PCR ମେସିନ୍ରେ ରଖିବା ନୁହେଁ, ଏବଂ ତାପରେ ପ୍ରୋଗ୍ରାମ ବୃଦ୍ଧି କରିବାକୁ ଆରମ୍ଭ କରେ |ଯେତେବେଳେ ସିଷ୍ଟମ୍ ବିନ୍ୟାସକରଣ ସମାପ୍ତ ହୁଏ, ବିସ୍ତାରଣ ଆରମ୍ଭ ହୁଏ, ଯାହା ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାର ହୋଇପାରେ, ଏବଂ ହଟ-ଷ୍ଟାର୍ଟ PCR ଏହି ସମସ୍ୟାର ସମାଧାନ କରିପାରିବ |
ହଟ୍ ଷ୍ଟାର୍ଟ PCR କ’ଣ?ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀ ପ୍ରସ୍ତୁତ ହେବା ପରେ, ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ଉତ୍ତାପ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ କିମ୍ବା “ହଟ ଷ୍ଟାର୍ଟ” ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରାରେ (ସାଧାରଣତ 90 90 ° C ରୁ ଅଧିକ) ଏନଜାଇମ୍ ମୋଡିଫାୟର୍ ମୁକ୍ତ ହୋଇଥାଏ, ଯାହା ଦ୍ D ାରା DNA ପଲିମେରେଜ୍ ସକ୍ରିୟ ହୋଇଯାଏ |ପ୍ରକୃତ ସକ୍ରିୟ ସମୟ ଏବଂ ତାପମାତ୍ରା ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ଏବଂ ହଟ୍ ଷ୍ଟାର୍ଟ ମୋଡିଫାୟର୍ ର ପ୍ରକୃତି ଉପରେ ନିର୍ଭର କରେ |ଏହି ପଦ୍ଧତି ମୁଖ୍ୟତ D ଆଣ୍ଟିବଡି, ଆଫିନିଟି ଲିଗାଣ୍ଡ୍, କିମ୍ବା ରାସାୟନିକ ମୋଡିଫାୟର୍ ଭଳି ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରାଜର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ପ୍ରତିରୋଧ କରିବା ପାଇଁ ମୋଡିଫାୟର୍ ବ୍ୟବହାର କରେ |ଯେହେତୁ ଡିଏନ୍ଏ ପଲିମେରେଜ୍ ର କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ପ୍ରତିବନ୍ଧିତ ହୋଇଛି, ହଟ୍ ଷ୍ଟାର୍ଟ ଟେକ୍ନୋଲୋଜି PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତାକୁ ନଷ୍ଟ ନକରି କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ଏକାଧିକ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବା ପାଇଁ ବହୁତ ସୁବିଧା ପ୍ରଦାନ କରିଥାଏ |
2. RT-PCR
RT-PCR (ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ PCR) ହେଉଛି mRNA ରୁ cDNA ରେ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଏବଂ ଏହାକୁ ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ଏକ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରିବା ପାଇଁ ଏକ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ କ techni ଶଳ |ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପ୍ରଣାଳୀ ହେଉଛି ପ୍ରଥମେ ଟିସୁ କିମ୍ବା କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ମୋଟ RNA ବାହାର କରିବା, ଓଲିଗୋ (dT) କୁ ପ୍ରାଇମର୍ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରିବା, cDNA ସିନ୍ଥାଇଜ୍ କରିବା ପାଇଁ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବା, ଏବଂ ତାପରେ ଲକ୍ଷ୍ୟ ଜିନ୍ ପାଇବା କିମ୍ବା ଜିନ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ PCR ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ଭାବରେ cDNA ବ୍ୟବହାର କରିବା |
3. ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR |
ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ ପରିମାଣିକ PCR (ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ ପରିମାଣିକ PCR,RT-qPCR |) PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ରଣାଳୀରେ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ଗୋଷ୍ଠୀ ଯୋଡିବାର ପଦ୍ଧତିକୁ ସୂଚାଇଥାଏ, ପ୍ରକୃତ ସମୟରେ ସମଗ୍ର PCR ପ୍ରକ୍ରିୟା ଉପରେ ନଜର ରଖିବା ପାଇଁ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ ସଂଗ୍ରହକୁ ବ୍ୟବହାର କରି ଏବଂ ଶେଷରେ ଟେମ୍ପଲେଟ୍କୁ ପରିମାଣିକ ଭାବରେ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିବା ପାଇଁ ମାନକ ବକ୍ର ବ୍ୟବହାର କରେ |ସାଧାରଣତ used ବ୍ୟବହୃତ qPCR ପଦ୍ଧତିଗୁଡ଼ିକରେ SYBR ଗ୍ରୀନ୍ I ଏବଂ TaqMan ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ |
4. ନଷ୍ଟ ହୋଇଥିବା PCR |
ନେଷ୍ଟେଡ୍ PCR ଦୁଇଟି ରାଉଣ୍ଡ PCR ଆମ୍ଲିଫିକେସନ୍ ପାଇଁ PCR ପ୍ରାଇମରର ଦୁଇଟି ସେଟ୍ ବ୍ୟବହାରକୁ ବୁ refers ାଏ ଏବଂ ଦ୍ୱିତୀୟ ରାଉଣ୍ଡର ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଉତ୍ପାଦ ହେଉଛି ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ଖଣ୍ଡ |
ଯଦି ପ୍ରଥମ ଯୁଗଳ ପ୍ରାଇମର୍ (ବାହ୍ୟ ପ୍ରାଇମର୍) ର ଏକ ଅସଙ୍ଗତି ଏକ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଉତ୍ପାଦକୁ ବ ified ାଇଥାଏ, ସେହି ସମାନ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଅଞ୍ଚଳର ଦ୍ pair ିତୀୟ ଯୁଗଳ ପ୍ରାଇମର୍ ଦ୍ୱାରା ସ୍ୱୀକୃତି ପ୍ରାପ୍ତ ହେବାର ସମ୍ଭାବନା ବହୁତ ଛୋଟ, ତେଣୁ ଦ୍ୱିତୀୟ ଯୁଗଳ ପ୍ରାଇମର୍ ଦ୍ୱାରା ବୃଦ୍ଧି, PCR ର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତାକୁ ଉନ୍ନତ କରାଯାଇଛି |ଦୁଇ ରାଉଣ୍ଡ PCR ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିବାର ଗୋଟିଏ ସୁବିଧା ହେଉଛି ଏହା ସୀମିତ ଆରମ୍ଭ DNA ରୁ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ଉତ୍ପାଦକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରେ |
5. ଟଚ୍ ଡାଉନ୍ PCR |
PCR ଚକ୍ର ପାରାମିଟରଗୁଡିକ ସଜାଡି PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟତାକୁ ଉନ୍ନତ କରିବାକୁ ଟଚ୍ ଡାଉନ୍ PCR |
ଟଚ୍ ଡାଉନ୍ PCR ରେ, ପ୍ରଥମ କିଛି ଚକ୍ର ପାଇଁ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ପ୍ରାଥମିକଗୁଡିକର ସର୍ବାଧିକ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା (Tm) ଠାରୁ କିଛି ଡିଗ୍ରୀ ସେଟ୍ ହୋଇଛି |ଉଚ୍ଚ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବିସ୍ତାରକୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ହ୍ରାସ କରିପାରିବ, କିନ୍ତୁ ସେହି ସମୟରେ, ଅଧିକ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ଟାର୍ଗେଟ୍ କ୍ରମର ପୃଥକତାକୁ ବ ate ାଇବ, ଫଳସ୍ୱରୂପ PCR ଅମଳ ହ୍ରାସ ପାଇବ |ତେଣୁ, ପ୍ରଥମ କିଛି ଚକ୍ରରେ, ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ସାଧାରଣତ cycle ସିଷ୍ଟମରେ ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ର ବିଷୟବସ୍ତୁ ବ to ାଇବା ପାଇଁ ଚକ୍ର ପ୍ରତି 1 ° C ହ୍ରାସ କରିବାକୁ ସ୍ଥିର ହୁଏ |ଯେତେବେଳେ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ସର୍ବୋଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରାକୁ ହ୍ରାସ ହୁଏ, ଅବଶିଷ୍ଟ ଚକ୍ରଗୁଡିକ ପାଇଁ ଆନ୍ନାଲିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା ବଜାୟ ରଖେ |
6. ସିଧାସଳଖ PCR |
ସିଧାସଳଖ PCR ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ବିଚ୍ଛିନ୍ନତା ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧତାର ଆବଶ୍ୟକତା ବିନା ନମୁନାରୁ ସିଧାସଳଖ ଲକ୍ଷ୍ୟ DNA ର ବିସ୍ତାରକୁ ବୁ .ାଏ |
ଦୁଇ ପ୍ରକାରର ପ୍ରତ୍ୟକ୍ଷ PCR ଅଛି:
ସିଧାସଳଖ ପଦ୍ଧତି: ଅଳ୍ପ ପରିମାଣର ନମୁନା ନିଅ ଏବଂ PCR ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ ଏହାକୁ ସିଧାସଳଖ PCR ମାଷ୍ଟର ମିକ୍ସରେ ଯୋଗ କର |
କ୍ରାକିଂ ପଦ୍ଧତି: ନମୁନା ନମୁନା କରିବା ପରେ, ଏହାକୁ ଲାଇସେଟରେ ମିଶାନ୍ତୁ, ଜିନୋମକୁ ମୁକ୍ତ କରିବା ପାଇଁ ଲାଇସେ, ଅଳ୍ପ ପରିମାଣର ଲାଇସେଡ୍ ସୁପରନେଟାଣ୍ଟ ନିଅନ୍ତୁ ଏବଂ ଏହାକୁ PCR ମାଷ୍ଟର ମିକ୍ସରେ ଯୋଡନ୍ତୁ, PCR ପରିଚୟ କର |ଏହି ପନ୍ଥା ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ କାର୍ଯ୍ୟ ପ୍ରବାହକୁ ସରଳ କରିଥାଏ, ସମୟକୁ ହ୍ରାସ କରିଥାଏ ଏବଂ ଶୁଦ୍ଧକରଣ ପଦକ୍ଷେପ ସମୟରେ DNA କ୍ଷୟକୁ ଏଡାଇଥାଏ |
7. SOE PCR |
ଓଭରଲପ୍ ଏକ୍ସଟେନ୍ସନ୍ PCR (SOE PCR) ଦ୍ୱାରା ଜିନ୍ ବିଭାଜନ PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ ଓଭରଲିପ୍ ଚେନ୍ ତିଆରି କରିବା ପାଇଁ ସଂପୃକ୍ତ ଶେଷ ସହିତ ପ୍ରାଇମର୍ ବ୍ୟବହାର କରେ, ଯାହା ଦ୍ the ାରା ପରବର୍ତ୍ତୀ ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ, ଓଭରଲିପ୍ ଶୃଙ୍ଖଳାର ବିସ୍ତାର ମାଧ୍ୟମରେ, ଏକ କ techni ଶଳର ବିଭିନ୍ନ ଉତ୍ସ ଯେଉଁଥିରେ ବର୍ଦ୍ଧିତ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ଓଭରଲିପ୍ ହୋଇଯାଏ | ଏବଂ ଏକତ୍ର ବିଭାଜିତ |ଏହି ଟେକ୍ନୋଲୋଜିର ବର୍ତ୍ତମାନ ଦୁଇଟି ମୁଖ୍ୟ ପ୍ରୟୋଗ ଦିଗ ଅଛି: ଫ୍ୟୁଜନ୍ ଜିନ୍ ନିର୍ମାଣ;ଜିନ୍ ସାଇଟ୍-ନିର୍ଦ୍ଦେଶିତ ପରିବର୍ତ୍ତନ |
8. IPCR
ଓଲଟା PCR (IPCR) ଦୁଇଟି ପ୍ରାଇମର୍ ବ୍ୟତୀତ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ବ pl ାଇବା ପାଇଁ ଓଲଟା ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ପ୍ରାଇମର୍ ବ୍ୟବହାର କରେ ଏବଂ ଏକ ଜଣାଶୁଣା DNA ଖଣ୍ଡର ଉଭୟ ପାର୍ଶ୍ୱରେ ଅଜ୍ଞାତ କ୍ରମକୁ ବ ifies ାଇଥାଏ |
IPCR ମୂଳତ adj ନିକଟସ୍ଥ ଅଜ୍ଞାତ ଅଞ୍ଚଳଗୁଡିକର କ୍ରମ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ଡିଜାଇନ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ପ୍ରାୟତ gen ଜିନ୍ ପ୍ରୋମୋଟର୍ କ୍ରମ ଅଧ୍ୟୟନ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ଅଙ୍କୋଜେନିକ୍ କ୍ରୋମୋଜୋମାଲ୍ ପୁନର୍ଗଠନ, ଯେପରିକି ଜିନ୍ ଫ୍ୟୁଜନ୍, ଟ୍ରାନ୍ସଲୋକେସନ୍ ଏବଂ ଟ୍ରାନ୍ସପୋଜିସନ୍;ଏବଂ ଭାଇରାଲ୍ ଜିନ୍ ଇଣ୍ଟିଗ୍ରେସନ୍, ସାଧାରଣତ now ବର୍ତ୍ତମାନ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ ସାଇଟ୍-ନିର୍ଦ୍ଦେଶିତ ମ୍ୟୁଟେଜେନେସିସ୍ ପାଇଁ, ଇପ୍ସିତ ମ୍ୟୁଟେସନ୍ ସହିତ ଏକ ପ୍ଲାସିମ୍ କପି କରନ୍ତୁ |
9. dPCR
ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକର ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିମାଣ ପାଇଁ ଡିଜିଟାଲ୍ PCR (dPCR) ହେଉଛି ଏକ କ que ଶଳ |
ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକର ପରିମାଣ ପାଇଁ ବର୍ତ୍ତମାନ ତିନୋଟି ପଦ୍ଧତି ଅଛି |ଫୋଟୋମେଟ୍ରି ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକର ଅବଶୋଷଣ ଉପରେ ଆଧାରିତ;ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ ଫ୍ଲୋରୋସେଣ୍ଟ୍ ପରିମାଣିକ PCR (ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR) Ct ମୂଲ୍ୟ ଉପରେ ଆଧାରିତ, ଏବଂ Ct ମୂଲ୍ୟ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ମୂଲ୍ୟ ସହିତ ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟାକୁ ସୂଚିତ କରେ ଯାହା ଚିହ୍ନଟ ହୋଇପାରିବ;ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ପରିମାଣ ଗଣନା ପାଇଁ ଏକକ-ଅଣୁ PCR ପଦ୍ଧତି ଉପରେ ଆଧାର କରି ଡିଜିଟାଲ୍ PCR ହେଉଛି ସର୍ବଶେଷ ପରିମାଣିକ ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟା |
ପୋଷ୍ଟ ସମୟ: ଜୁନ୍ -13-2023 |